Bestimmte Viren (z.B. Myxoviridae, Parvoviridae, Coronaviridae) besitzen Oberflächenstrukturen, die mit Rezeptoren von Erythrozyten bestimmter Tierarten eine biochemische Interaktion eingehen. Dadurch kommt es zu einer Verklumpung (=Agglutination) der Erythrozyten, die im HA-Test als Bodenhäutchen zu sehen ist.
Diese Verklumpung beruht dabei nicht auf einer immunologischen Reaktion.
Durchführung eines Hämagglutinationstests
TEIL 1:
1. Herstellen einer 0,5 %igen Suspension humaner Erythrozyten in PBS (phosphate-buffered saline) / 20 % Gelatine (3,98 ml PBS/20 % Gelatine + 20 µl Erythrozyten-Stammlösung)
2. Vorlegen von jeweils 50 µl PBS/20 % Gelatine in die wells A1-A12, B1-B12 und C1 der Multiwell-Platte mit rundem Boden!
3. Zugabe von 50 µl Virussuspension 1 (Rabbit Haemorrhagic Disease Virus) in well A1 und 50 µl Virussuspension 2 (Rabbit Haemorrhagic Disease Virus) in well B1.
4. Sukzessives Verdünnen der Virussuspension 1 durch Entnahme von 50 µl aus well A1 und Zugabe zu well A2, Mischen der Virus/PBS-Lösung und Entnahme von 50 µl aus well A2 und Zugabe zu well A3, Mischen ..............., Entnahme von 50 µl aus well A12 und verwerfen.
5. Ebenso sukzessives Verdünnen der Virussuspension 2 durch Entnahme von 50 µl aus well B1 und Zugabe zu well B2, Mischen der Virus/PBS-Lösung und Entnahme von 50 µl aus well B2 und Zugabe zu well B3, Mischen ..............., Entnahme von 50 µl aus well B12 und verwerfen.
6. Zugabe von 50 µl der verdünnten Erythrozytenlösung zu den wells A1-A12 und B1-B12, sowie zum well C1, das als Negativ-Kontrolle dient und deshalb keine Virussuspension enthält.
7. Inkubation der Ansätze für ca. 30 min bei Raumtemperatur.
8. Aufbewahren der 0.5 %igen Erythrozytenlösung für Experiment 6.
9. Auswertung des Ergebnisses: Knopfbildung (= keine Agglutination) oder Bodenhäutchen (= Agglutination). Eine HA-Einheit ist dabei die höchste Virusverdünnungmit einwandfrei sichtbarem Bodenhäutchen (siehe Abbildung).
Für Hämagglutination-Inhibitionstest werden 4 HA-Einheiten Virus verwendet