Reverse Transkriptase Nachweis                              

Retroviren können auf Grund ihrer reversen Transkriptase identifiziert werden. Diese Enzym kommt nur bei dieser Virusgruppe vor.

2 Nachweisarten werden unterschieden

• Einsatz von exogenen Templates (Matritzen) : der Virussuspension wird fremde RNA zugesetzt, die dann als DNA nachgewiesen wird
• Einsatz  von endogenen Templates: Viruseigene RNA wird transkribiert

Durch Einbau von radioaktiv markierter Nukleinsäure (häufig Guanosin-triphosphat dGTP) kann die reverse Transkriptase-Aktivität nachgewiesen werden.

Testverlauf:

Virus aus Kultur wird lysiert

(Exogene RNA zugeben)

Nucleinsäure-Cocktail und Tritium-markierte dGTP zugeben  

1 Stunde bei 42 °C inkubieren

Reaktion stoppen und Probe auf Eis geben

Probe durch Filterpapier waschen und fixieren

Nachweis durch  Zugabe von Scintilationsflüssigkeit und Scintilation count.